ChIP-qPCR

  • 简介
  • 技术特点
  • 技术服务流程
  •        Aksomics(原康成生物)提供ChIP-qPCR服务,能够检测特定转录因子/组蛋白修饰与已知基因启动子区域的结合;在已知启动子范围内寻找特定转录因子/组蛋白修饰的结合位点。

           ChIP-qPCR完美结合了ChIP技术和实时定量PCR技术。ChIP技术利用抗体特异性富集与特定转录因子/组蛋白修饰结合的DNA片段;qPCR技术使用SYBR荧光染料,非特异性的掺入DNA双链,发射荧光,保证荧光信号的增加与PCR产物的增加完全同步,最后利用Ct值进行定量分析。ChIP-qPCR能够专一,灵敏,快速,高重复地定量生物样品中特定转录因子/组蛋白修饰与已知基因启动子的结合。

  • ● 高特异性,针对感兴趣的基因启动子设计特异性的实时荧光定量PCR引物;

    ● 超宽的线性范围,可跨越7个数量级;

    ● 精确度高,重复性好;

    ● 灵敏度高


  • 实验流程

    A. 样品交联,甲醛处理细胞,交联DNA与DNA结合蛋白

    B. 超声打断染色质,裂解细胞,并以超声波将染色质打断成400-500bp的片段

    C. 染色质免疫共沉淀,将B所得片段分成两份,一份与特异性抗体进行免疫共沉淀(ChIP),另一份作为Total input样品

    D. DNA纯化,将C所得两份蛋白-DNA复合物解交联,纯化分离DNA片段。ChIP富集的DNA片段(ChIP DNA),Total input样品中的DNA片段(Total input DNA)

    E. 实时荧光定量PCR检测



    数据处理

      ● Total input DNA样品作为模板,用待测基因特异性引物进行qPCR,检测得到Ct值(Input)

      ● ChIP DNA样品作为模板,用待测基因特异性引物进行qPCR,检测得到Ct值(ChIP)

      ● 待测基因免疫共沉淀的效率(ChIP / Total input)可通过以下公式计算:

        %(ChIP / Total input) = 2^[ Ct (Input)- Ct (ChIP) ] * 100



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